常見(jiàn)的有理染色,、WesternBlot、PCR等），實(shí)驗(yàn)儀器是否需要預(yù)約使用,。如果需要外送公司檢測(cè),，需要提前聯(lián)系好商家,，以及了解清楚樣本如何獲取,，如何運(yùn)輸。飼養(yǎng)動(dòng)物及干預(yù)動(dòng)物購(gòu)買(mǎi)后需要將時(shí)間節(jié)點(diǎn)提前規(guī)劃好,，比如,，周需要做什么？測(cè)量體重,？觀察飲食,？測(cè)量需要的指標(biāo)？中間有無(wú)特殊操作,？比如灌胃,、測(cè)量體重、做CT檢測(cè),、取血,？……第幾周取材？取材需要哪些,？預(yù)實(shí)驗(yàn)方案就要提前設(shè)計(jì)清楚以上內(nèi)容,。取材及樣品準(zhǔn)備取材需要提前到動(dòng)物房禁食、稱體重,、取出動(dòng)物,、手術(shù)的,、固定所需要的試劑和EP管，WesternBlot和PCR所需要的樣本儲(chǔ)存條件,。比如凍存管、EP管,，是否需要冰塊,？是否需要液氮？取材當(dāng)天需要多少人,？是否需要請(qǐng)人幫忙,？如果所需要取出的樣本較多，建議大家請(qǐng)人一起幫忙,，流水線作業(yè),，這樣能節(jié)省時(shí)間，并且能保證樣品的質(zhì)量,。如果請(qǐng)人,，每個(gè)人需要負(fù)責(zé)哪一板塊的工作，比如誰(shuí)負(fù)責(zé),，誰(shuí)負(fù)責(zé)取血液,，誰(shuí)負(fù)責(zé)取，誰(shuí)負(fù)責(zé)拍照,、誰(shuí)負(fù)責(zé)儲(chǔ)存,，都需要提前規(guī)劃交代清楚。實(shí)驗(yàn)指標(biāo)檢測(cè)如果是需要自己做的檢測(cè),，比如常見(jiàn)的WesternBlot,、PCR，建議提前可以看看教程（無(wú)論是視頻還是貼吧,，都要自己多方參考）,。有了一定的理論基礎(chǔ)后，再向老師,、師兄師姐學(xué)習(xí)經(jīng)驗(yàn)和技術(shù),。此外，動(dòng)物模型的倫理問(wèn)題也不容忽視,，科研人員需要在符合倫理規(guī)定的前提下進(jìn)行相關(guān)研究,。北京疾病科研技術(shù)服務(wù)技術(shù)

應(yīng)退回純酒精中重新脫水，然后再透明,，否則切片難以鏡檢,。（4）二甲苯應(yīng)盡量保持無(wú)水，應(yīng)經(jīng)常更換,，或用紗布包無(wú)水硫酸銅放入染色缸內(nèi)吸收水分,。5.透蠟注意事項(xiàng)（1）透蠟的目的是除去組織中的透明劑（如二甲苯等）,，使石蠟滲透到組織內(nèi)部達(dá)到飽和程度以便包埋。透蠟時(shí)間根據(jù)組織大小而定,。（2）盡量保持在較低溫度中進(jìn)行,，以石蠟不凝固為度。（3）透蠟溫度要恒定,，不可忽高忽低,。（4）操作要迅速，力求在短的時(shí)間內(nèi)完成石蠟透入過(guò)程,，以免引起組織變硬,、變脆、收縮等,。（5）注意溫度不要過(guò)高,，以免組織發(fā)脆。6.染色水洗注意事項(xiàng)（1）染色原理：伊紅主要染細(xì)胞質(zhì),，著色濃淡應(yīng)與蘇木精染細(xì)胞核的濃淡相配合,，如果細(xì)胞核染色較濃，細(xì)胞質(zhì)也應(yīng)濃染,，以獲得鮮明的對(duì)比,。（2）染色時(shí)間應(yīng)根據(jù)染色劑的成熟程度及室溫高低，適當(dāng)縮短或延長(zhǎng),。室溫高時(shí)促進(jìn)染色,，染色時(shí)間可短些，否則可適當(dāng)延長(zhǎng)時(shí)間,，冬季室溫低時(shí)可放入恒溫箱中染色,。（3）注意流水不能過(guò)大，以防切片脫落,。（4）如果細(xì)胞核染色較淺,，細(xì)胞質(zhì)也應(yīng)淡染?？稍谝良t乙醇液中滴加數(shù)滴冰醋酸助染,，促使細(xì)胞質(zhì)容易著色，并且經(jīng)乙醇脫水時(shí)不易褪色,。上海小鼠科研技術(shù)服務(wù)分離原代心肌細(xì)胞培養(yǎng)傳代,。

科手術(shù)設(shè)備|細(xì)胞/組織支持系統(tǒng)|膜片鉗|輔助設(shè)備|其它常用耗材燒杯|漏斗|量筒|廣口罐|研缽和研杵|手套|移液管|移液器(Pipette)單道手動(dòng)移液器|單道電動(dòng)移液器|多道手動(dòng)移液器多道電動(dòng)移液器|正置換移液器|瓶口分液器吸頭(Tips)濾芯吸頭(滅菌)|濾芯吸頭(未滅菌)|普通吸頭(滅菌)普通吸頭(未滅菌)|多道移液器吸頭液體工作站吸頭|其它瓶(Bottle)離心瓶|稱量瓶|存儲(chǔ)瓶|比重瓶|血清瓶|滴瓶吸氣瓶|細(xì)胞培養(yǎng)瓶|培養(yǎng)基瓶|其它瓶(Flask)藍(lán)蓋瓶|燒瓶|平底燒瓶|克氏(長(zhǎng)頸)燒瓶|碘測(cè)定燒瓶|蒸餾燒瓶|容量瓶|過(guò)濾瓶|其它管(Tube&Vial)離心管|微離心管|樣品儲(chǔ)存管|凍存管|反應(yīng)管聚乙烯保存管|細(xì)胞培養(yǎng)管|自動(dòng)上樣管|其它PCR耗材PCR管|PCR條板|PCR板|實(shí)時(shí)定量PCR毛細(xì)管其它微孔板微孔板(96孔)|微孔板(384孔)|微孔板。

外泌體作為藥物載體由于特殊的結(jié)構(gòu)和循環(huán)方式,，外泌體作為藥物運(yùn)輸?shù)妮d體具有獨(dú)特的優(yōu)勢(shì),。例如外泌體的尺寸分布能夠增強(qiáng)滲透滯留效應(yīng)，從而有選擇性地深入組織;其外層磷脂雙分子層可以保護(hù)內(nèi)容物不受各種生物酶的影響,，維持各種生物分子的活性;外泌體普遍存在于各種體液和組織中,，其體積小,，結(jié)構(gòu)、組成與細(xì)胞膜類似,，導(dǎo)致外泌體可以在避開(kāi)免疫系統(tǒng)監(jiān)督的同時(shí)深入組織內(nèi)部,，有較好的生物相容性;當(dāng)采用內(nèi)源外泌體時(shí)，能明顯降低其他藥物載體可能引起的有害免疫反應(yīng);除此之外,，某些細(xì)胞來(lái)源或經(jīng)特殊修飾過(guò)的外泌體具有良好的特異性,，可以與特定的或組織結(jié)合。因此,，載藥成為外泌體研究的一個(gè)重要分支，具有良好的應(yīng)用前景,。在外泌體中引入藥物的方式包括體內(nèi)裝載和體外裝載兩種,。體內(nèi)藥物裝載可以通過(guò)傳統(tǒng)方法(如病毒轉(zhuǎn)染、脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染或電穿孔等)轉(zhuǎn)染來(lái)源細(xì)胞,，編碼感興趣的RNA或蛋白質(zhì),，也可以使藥物與來(lái)源細(xì)胞共混，使細(xì)胞分泌產(chǎn)生含有目標(biāo)生物分子的外泌體,。體外藥物裝載則首先需要得到純化的外泌體,，然后將感興趣的藥物通過(guò)電穿孔或脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染等方法裝入純化的外泌體。外泌體內(nèi)可裝載的藥物包括小分子化學(xué)藥物,、蛋白質(zhì)和多肽,、核酸藥物、天然產(chǎn)物等,。動(dòng)物疾病模型還為科研人員提供了研究人類疾病的跨學(xué)科方法,。

如胰腺，一般取胰島較多的胰腺尾部,；肺應(yīng)取有細(xì)支氣管及帶有軟骨片的小支氣管部,。如果實(shí)驗(yàn)需進(jìn)行多樣本的采集，采集順序應(yīng)按照：消化,，神經(jīng)系統(tǒng),，皮膚，肌肉等的順序進(jìn)行,。選好塊的切面,。熟悉某些成分安排，然后決定其切面的走向,；如一長(zhǎng)管狀以橫切面較好,。切除不需要的部分。特別是周圍的脂肪等,，應(yīng)盡可能掉,，否則給固定,、脫水、浸蠟,、切片等帶來(lái)一些不必要的問(wèn)題,。樣品的固定（1）固定的方法：①小塊固定法：從動(dòng)物取下的小塊，立即置入液態(tài)固定劑（這是應(yīng)用經(jīng)常的方法）,。②注射/灌注固定法：某些塊由于體積過(guò)大或固定液極難滲入內(nèi)部或需要對(duì)整個(gè)臟器或整個(gè)動(dòng)物進(jìn)行固定,，這時(shí)宜采用注射固定法，將固定液注入血管,，經(jīng)血管分支到達(dá)整個(gè)和全身,，從而得到充分的固定。另,，空腔比如肺,，肺內(nèi)含有空氣，固定液難以滲入,，建議先做肺灌注,，使得肺充盈滿固定液以后再進(jìn)行保存，如果空腔中氣體沒(méi)有排出,，后續(xù)可能影響固定效果（沒(méi)有灌注的肺會(huì)浮在液體表面不利于固定,，切片以后也會(huì)看到很多的空泡）。③蒸汽固定法：比較細(xì)小而薄的標(biāo)本,，可用鋨酸或甲醛蒸汽固定,。主要用于血液或細(xì)胞涂片以及某些薄膜的固定。,。實(shí)驗(yàn)技巧——做好細(xì)胞凍存,，保證細(xì)胞質(zhì)量。海南科研技術(shù)服務(wù)外包

EdU細(xì)胞增殖檢測(cè)是一種快速,、準(zhǔn)確,、靈敏的細(xì)胞增殖檢測(cè)方法.北京疾病科研技術(shù)服務(wù)技術(shù)

3）基因/蛋白質(zhì)表達(dá)定性或定量檢測(cè)在進(jìn)行分子檢測(cè)的過(guò)程中，保持核酸和蛋白質(zhì)的完整性至關(guān)重要,，因此在取樣過(guò)程中,，應(yīng)盡量避免核酸及蛋白質(zhì)的降解。如不注意采樣過(guò)程,，將會(huì)導(dǎo)致樣本中的核酸及蛋白質(zhì)的無(wú)差別降解,，嚴(yán)重影響后續(xù)分子檢測(cè)結(jié)果。在條件允許的情況下,，樣本在離體后應(yīng)立刻裝入凍存管內(nèi),，并立即放入液氮中進(jìn)行冷凍。在RNA提取樣本的保存過(guò)程中,，可以選擇非冷凍型RNA保存液或Trizol試劑進(jìn)行RNA酶的,。針對(duì)蛋白質(zhì)提取樣本的保存,，我們同樣可以使用商品化的蛋白酶劑進(jìn)行短期處理。聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（PolymeraseChnReaction,，PCR）及免印跡（Westernblotting,，WB），這兩種實(shí)驗(yàn)手段是分子學(xué)檢測(cè)中不可或缺的一部分,，也是發(fā)表至關(guān)重要的分子檢測(cè)數(shù)據(jù),。PCR主要用來(lái)對(duì)基因在基因組層面或轉(zhuǎn)錄層面的變化進(jìn)行定性或定量檢測(cè)，而WB則主要用來(lái)對(duì)某一蛋白質(zhì)的表達(dá)進(jìn)行定量檢測(cè),。（4）轉(zhuǎn)錄組學(xué),、蛋白質(zhì)組學(xué)及代謝組學(xué)檢測(cè)隨著檢測(cè)水平及相關(guān)產(chǎn)業(yè)的不斷發(fā)展，各類組學(xué)檢測(cè)的價(jià)格降低,，實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)中也常常運(yùn)用組學(xué)檢測(cè)來(lái)提升實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)的檔次,。在我們進(jìn)行轉(zhuǎn)錄組學(xué)及蛋白質(zhì)組學(xué)的檢測(cè)過(guò)程中，同樣是要首先確保目標(biāo)RNA或蛋白質(zhì)的片段完整性,。北京疾病科研技術(shù)服務(wù)技術(shù)

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